關(guān)鍵詞:熒光原位雜交FISH服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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熒光原位雜交FISH服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
相關(guān)溶液的配制
（1）20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g檸檬酸鈉，加水至1 000 mL（用10 mol/L NaOH調(diào)pH 至7.0）。
（2）去離子甲酰胺（DF）：將10 g混合床離子交換樹(shù)脂加入100 mL甲酰胺中。電磁攪拌30 min，用Whatman l號(hào)濾紙濾。
（3）體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC：35 mL甲酰胺，5 mL 20×SSC，10 mL水。
（4）體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC：100 mL甲酰胺，20 mL 20×SSC，80 mL水。
（5）體積分?jǐn)?shù)50%硫酸葡聚糖（DS）：65℃水浴中融化，4℃或-20℃保存。
（6）雜交液：8 μL體積分?jǐn)?shù)25%DS，20 μL 20×SSC混合。（或40 μL體積分?jǐn)?shù)50% DS，20 μL 20×SSC，40 μL ddH2O混合）取上述混合液50 μL，與5 μL DF混合即成。其終濃度為體積分?jǐn)?shù)10% DS，2×SSC，體積分?jǐn)?shù)50% DF。
（7）PI/antifade溶液
PI原液：先以雙蒸水配置溶液，濃度為100 μg/mL，取出1 mL，加39 mL雙蒸水，使終濃度為2.5 μg/mL。Antifade原液：以PBS緩沖液配制該溶液，使其濃度為10 mg/mL，用0.5 mmol/L的NaHCO3調(diào)pH值為8.0。取上述溶液1 mL，加9 mL甘油，混勻。
PI/antifade溶液：PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻，－20℃保存?zhèn)溆谩?br> （8）DAPI/antifade溶液：用去離子水配制1mL/mg DAPI儲(chǔ)存液，按體積比1:300，以antifade溶液稀釋成工作液。
（9）封閉液I：體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。
（10）封閉液II：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。
（11）熒光檢測(cè)試劑稀釋液：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。
（12）洗脫液：100 mL 20×SSC，加水至500 mL，加Tween20 500 μL。
優(yōu)點(diǎn):
1、熒光試劑和探針經(jīng)濟(jì)、**;
2、探針?lè)€(wěn)定，一次標(biāo)記后可在兩年內(nèi)使用;
3、實(shí)驗(yàn)周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準(zhǔn)確;
4、FISH可定位長(zhǎng)度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針相當(dāng);
5、多色FISH通過(guò)在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測(cè)多種序列;
6、既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。
缺點(diǎn):不能達(dá)到100%雜交，特別是在應(yīng)用較短的cDNA探針時(shí)效率明顯下降。