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上海拜力生物科技有限公司
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郵編 201108
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新聞詳情
培養(yǎng)基配制的質量控制
日期:2025-05-14 19:11
瀏覽次數:753
摘要:
一、配制時的質量控制
( 1 )容器:配制和分裝培養(yǎng)基的燒瓶、平皿或試管等器材應為中性,無酸、堿抑制物殘留,平皿底部要平,以免瓊脂厚薄不一,影響藥敏試驗結果。
( 2 )成分來源:各種成分來源可靠,不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要求的培養(yǎng)基,如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗( O / F 試驗),除加入葡萄糖外,不能含有其他糖類,指示劑不能用乙醇溶液,避免 O / F 試驗的假陽性。培養(yǎng)基配制用水應是蒸餾水。
( 3 ) pH 值調整:根據培養(yǎng)基的不同要求調整 pH 值,控制在要求范圍的± 0.2 之內。應當注意,培養(yǎng)基在高壓滅菌后其 pH 值降低 0.1 ~ 0.2 ,故矯正時應比實際需要 p H 值高 0.1 ~ 0.2 。
( 4 )滅菌:根據培養(yǎng)基所含成分及配制數量的不同,選擇不同的滅菌方式,既要達到滅菌效果,又不破壞培養(yǎng)基成分。一般對穩(wěn)定的培養(yǎng)基,如 MH 瓊脂、營養(yǎng)瓊脂可用高壓滅菌,即 121 ℃ 15min ;而含糖的培養(yǎng)基則以 108 ℃ 滅菌為好,以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等,可采用間隙滅菌法滅菌。
( 5 )分裝:根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養(yǎng)基所用的平皿、試管要求清潔,不殘留酸堿;制備平板培養(yǎng)基時,操作臺要水平,以避免瓊脂平板厚薄不一,同時確保無菌操作。
二、配制后質量控制
( 1 )培養(yǎng)基外觀情況:包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發(fā)現培養(yǎng)基表面有裂紋或與培養(yǎng)皿的邊緣分離,說明培養(yǎng)基有脫水現象,必須丟棄。
( 2 )無菌試驗:每一批配好的培養(yǎng)基均須進行無菌試驗。先滅菌后分裝的培養(yǎng)基,可采用抽樣方法試驗,少于 100 個樣本通常選取 5 %~ 10 %的量,如果配制大量培養(yǎng)基,則任意選取 10 個培養(yǎng)基;無菌分裝培養(yǎng)基則需全部做無菌試驗。樣本在 35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養(yǎng),如培養(yǎng)基含有血液,則需再置于室溫 1 天,以檢查嗜冷菌。選擇性培養(yǎng)基因含有抑制物質,能抑制許多微生物,因此,可加入 10 倍量的無菌液體培養(yǎng)基,稀釋抑制物質,以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗,接種時,也要檢查每個平板上的可見菌落。
( 3 )性能測試:每一批新制或新購的培養(yǎng)基,使用前均須取已知性質的庫存菌種進行性能測試。培養(yǎng)基按目的不同可分為增菌培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。
①增菌培養(yǎng)基:接種少量難以生長的細菌,在一定時間內觀察增菌情況,細菌能生長的*小接種濃度越小,說明增菌培養(yǎng)基性能愈好。
②分離培養(yǎng)基:要求目的菌生長良好,非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多,較好的方法是將測試菌調成 0 . 5 麥氏濁度的菌懸液,再用 0.001ml 的標準接種環(huán)涂劃在培養(yǎng)基上,觀察菌落生長。
③鑒定培養(yǎng)基:應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂,須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌 3 種菌分別接種 3 支培養(yǎng)基,若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性,斜面產堿/高層產酸,斜面產堿/高層產堿,質量才算合格。
( 1 )容器:配制和分裝培養(yǎng)基的燒瓶、平皿或試管等器材應為中性,無酸、堿抑制物殘留,平皿底部要平,以免瓊脂厚薄不一,影響藥敏試驗結果。
( 2 )成分來源:各種成分來源可靠,不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要求的培養(yǎng)基,如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗( O / F 試驗),除加入葡萄糖外,不能含有其他糖類,指示劑不能用乙醇溶液,避免 O / F 試驗的假陽性。培養(yǎng)基配制用水應是蒸餾水。
( 3 ) pH 值調整:根據培養(yǎng)基的不同要求調整 pH 值,控制在要求范圍的± 0.2 之內。應當注意,培養(yǎng)基在高壓滅菌后其 pH 值降低 0.1 ~ 0.2 ,故矯正時應比實際需要 p H 值高 0.1 ~ 0.2 。
( 4 )滅菌:根據培養(yǎng)基所含成分及配制數量的不同,選擇不同的滅菌方式,既要達到滅菌效果,又不破壞培養(yǎng)基成分。一般對穩(wěn)定的培養(yǎng)基,如 MH 瓊脂、營養(yǎng)瓊脂可用高壓滅菌,即 121 ℃ 15min ;而含糖的培養(yǎng)基則以 108 ℃ 滅菌為好,以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等,可采用間隙滅菌法滅菌。
( 5 )分裝:根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養(yǎng)基所用的平皿、試管要求清潔,不殘留酸堿;制備平板培養(yǎng)基時,操作臺要水平,以避免瓊脂平板厚薄不一,同時確保無菌操作。
二、配制后質量控制
( 1 )培養(yǎng)基外觀情況:包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發(fā)現培養(yǎng)基表面有裂紋或與培養(yǎng)皿的邊緣分離,說明培養(yǎng)基有脫水現象,必須丟棄。
( 2 )無菌試驗:每一批配好的培養(yǎng)基均須進行無菌試驗。先滅菌后分裝的培養(yǎng)基,可采用抽樣方法試驗,少于 100 個樣本通常選取 5 %~ 10 %的量,如果配制大量培養(yǎng)基,則任意選取 10 個培養(yǎng)基;無菌分裝培養(yǎng)基則需全部做無菌試驗。樣本在 35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養(yǎng),如培養(yǎng)基含有血液,則需再置于室溫 1 天,以檢查嗜冷菌。選擇性培養(yǎng)基因含有抑制物質,能抑制許多微生物,因此,可加入 10 倍量的無菌液體培養(yǎng)基,稀釋抑制物質,以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗,接種時,也要檢查每個平板上的可見菌落。
( 3 )性能測試:每一批新制或新購的培養(yǎng)基,使用前均須取已知性質的庫存菌種進行性能測試。培養(yǎng)基按目的不同可分為增菌培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。
①增菌培養(yǎng)基:接種少量難以生長的細菌,在一定時間內觀察增菌情況,細菌能生長的*小接種濃度越小,說明增菌培養(yǎng)基性能愈好。
②分離培養(yǎng)基:要求目的菌生長良好,非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多,較好的方法是將測試菌調成 0 . 5 麥氏濁度的菌懸液,再用 0.001ml 的標準接種環(huán)涂劃在培養(yǎng)基上,觀察菌落生長。
③鑒定培養(yǎng)基:應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂,須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌 3 種菌分別接種 3 支培養(yǎng)基,若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性,斜面產堿/高層產酸,斜面產堿/高層產堿,質量才算合格。
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